Ic50 là gì

Pmùi hương pháp Đánh Giá hoạt tính khử tế bào ung thỏng

Phương thơm pháp 1: Phương pháp MTT (3--2,5-diphenyltetrazol brom)

Hoạt tính khử tế bào ung thư của những thích hợp chất sẽ được xác định theo phương thức MTT (3--2,5-điphenyltetrazol brom). Ba cái tế bào ung thỏng bạn dự con kiến sẽ áp dụng là HL-60 (human adễ thương promyeloid leukemia - ung thư máu), PC-3 (human prostate cancer - ung thư tuyến đường chi phí liệt), SNU-C5 (human colon cancer - ung tlỗi ruột kết) được nuôi cấy vào môi trường RPXiaoMI 1640 bổ sung 10% huyết tkhô nóng phổi bò (fetal bovine serum) với penicillin/streptomycin (khớp ứng 100 U/mL với 100 mg/mL) sinh sống 37 °C vào môi trường thiên nhiên 5 % CO2được làm độ ẩm. Các tế bào cải tiến và phát triển theo cung cấp số nhân được áp dụng trong số thể nghiệm.quý khách hàng sẽ xem: Giá trị ic50 là gì

Phương pháp MTT được tiến hành nhỏng sau: Các loại tế bào ung tlỗi fan (HL-60; 3 × 105 tế bào/mL, PC-3; 5 × 105 tế bào/mL, và SNU-C5; 1 × 105 tế bào/mL) được xử lý vào 3 ngày với những thích hợp chất sinh hoạt nồng độ 0,01, 0,1, 1, 10, 50 và 100 μM hoặc cùng với những cặn tách nghỉ ngơi mật độ 0,01, 0,1, 1, 10, 50 cùng 100 μg/mL. Sau quá trình ủ, 0,1 mg (50 µL của dung dịch 2 mg/mL) MTT (Sigma, Saint Louis, MO, USA) được bổ sung vào từng giếng và những tế bào sau đo thường xuyên được ủ sống 37°C trong 4h. Các phiến được tiến hành ly vai trung phong làm việc 1000 vòng/phút ít vào 5 phút sinh sống nhiệt độ phòng với tiếp nối môi trường xung quanh được loại trừ một phương pháp cảnh giác. Sau đó, dimetylsunfoxit (150 µL) được cho vô mỗi giếng để tổng hợp các tinh thể formazan. Các phiến được đọc tức thì sau đó sinh sống bước sóng 540 nm trên thiết bị gọi vi phiến (Amerssay mê Pharmacia Biotech., USA). Tất cả các thí nghiệm mọi được tiến hành lặp lại 3 lần cùng giá trị vừa phải được tính toán. Kết quả được thể hiện là Phần Trăm khắc chế vẫn tạo nên sự giảm độ mạnh tiêu thụ Khi xử lý cùng với những chất test đối chiếu cùng với đối chứng âm. Đường cong nhờ vào độ đậm đặc được kiến tạo và mật độ ức chế 50 tỷ lệ (IC50) được xác định cho các mẫu mã demo cũng tương tự mang lại từng dòng tế bào. Giá trị IC50 2 tế bào được thắt chặt và cố định vào lòng giếng TCA vào khoảng 30 phút, được nhuộm bằng SRB trong khoảng 1 tiếng ở 37oC. Đổ bỏ SRB và các giếng thí nghiệm được rửa 3 lần bằng 5% axit axetic rồi để khô vào không khí ở nhiệt độ phòng.

Bạn đang xem: Ic50 là gì

- Cuối cùng, sử dụng dung dịch tris (hydroxymethyl)aminomethane 10 mM để hòa rã lượng SRB đã bám và nhuộm các phân tử protein, đưa lên máy lắc đĩa lắc nhẹ vào 10 phút và sử dụng máy ELISA Plate Reader (Bio-Rad) để hiểu kết quả về hàm lượng màu của chất nhuộm SRB thông qua phổ hấp thụ ở bước sóng 515 nm. Khả năng sống sót của tế bào Lúc có mặt chất thử sẽ được xác định thông qua công thức sau:


*

Các phép thử được lặp lại 3 lần để đảm bảo tính chính xác. Ellipticine (Sigma) luôn được sử dụng làm chất đối chứng dương và được thử nghiệm ở các nồng độ 10, 2, 0,4 và 0,08 μg/mL. DMSO 10% luôn được sử dụng như đối chứng âm. Giá trị IC50 sẽ được xác định nhờ vào phần mềm máy vi tính TableCurve sầu.

Phương thơm pháp 3: Phương pháp WST-8 tại Viện Y học tự nhiên, Đại học Toyama, Nhật Bản

Ngoài ra, hoạt tính gây độc tế bào còn được thử nghiệm theo phương pháp WST-8 tại Viện Y học tự nhiên, Đại học Toyama, Nhật Bản:

Các dòng tế bào A549 (ung thư phổi), HeLa (ung thư cổ tử cung) và TIG- 3 (tế bào thường) được duy trì trong môi trường MEMα (Wako pure chemicals Ind. Ltd., Osaka, Japan); PANC-1 và PSN-1 (ung thư tuyến tụy) được lưu giữ vào môi trường DMEM (Wako pure chemicals Ind., Ltd., Osaka, Japan). Các môi trường này được bổ sung 10% fetal bovine serum - FBS (Gibco BRL Products Gaithersburg, MD) và 1% dung dịch kháng sinh (Sigma- Aldrich Inc., St. Louis, U.S.A.). Tế bào vạc triển theo cấp số nhân được thu thập và 2×103 tế bào trong 100 μL môi trường được đưa vào mỗi giếng của kxuất xắc 96 giếng (Corning Inc., NY, U.S.A ). Sau lúc ủ 24 giờ trong tủ ấm 5% CO2 ở 37oC để cố định tế bào, tế bào được xử lý với các nồng độ khác nhau của mẫu thử trong môi trường tương ứng của bọn chúng (100 μL). Sau 72 giờ, môi trường được nạm đổi 10% WST-8 với cuối cùng là đếm % tế bào sống sót bằng biện pháp đo mật độ quang tại 450 nm. 5-Fluorouracil được sử dụng làm đối chứng dương.

Pmùi hương pháp nhận xét hoạt tính chống viêm

Pmùi hương pháp 1

Những chủng vi khuẩn với nấm kiểm định tạo bệnh ở người thường được sử dụng:

- Bacillus subtilis (ATCC 6633): Là trực khuẩn gram (+), sinch bào tử, thường không khiến bệnh.


- Staphylococcus aureus (ATCC 13709): Cầu khuẩn gram (+), tạo mủ các vết thương, vết bỏng, khiến viêm họng, nhiễm trùng tất cả mủ bên trên da với những cơ quan lại nội tạng;

- Escheriphân tách coli (ATCC 25922): Gram (-), tạo một số bệnh về đường tiêu hoá như viêm dạ dày, viêm đại tràng, viêm ruột, viêm lỵ trực khuẩn.


- Pseudomonas aeruginosa (ATCC 15442): Gram (-), trực khuẩn mủ xanh, khiến nhiễm trùng huyết, các nhiễm trùng ở da và niêm mạc, khiến viêm đường tiết niệu, viêm màng óc, màng trong tim, viêm ruột.


- Candida albicans (ATCC 10231): Là nấm men, thường gây bệnh tưa lưỡi ở trẻ em và các bệnh phụ khoa.


- Lactobacillus fermentum (Lp B14): Gram (+), là loại vi khuẩn đường ruột lên men hữu ích, thường tất cả mặt vào hệ tiêu hoá của người với động vật.


- Enterococcus faecium (B650): Gram (+), vi khuẩn tạo bệnh viêm đường tiết niệu, viêm ruột thừa, viêm màng trong lòng, viêm màng óc.

Cách tiến hành: Thực hiện dựa trên phương pháp vi định lượng trên môi trường lỏng. Đây là phương pháp thử hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định cùng nấm nhằm đánh giá mức độ kháng khuẩn mạnh yếu của những mẫu thử trải qua các giá chỉ trị thể hiện hoạt tính là MIC (nồng độ ức chế tối thiểu), IC50 (nồng độ ức chế 50%), MBC (nồng độ diệt khuẩn tối thiểu).

- Mẫu ban đầu được pha loãng trong DMSO với nước giấu vô trùng thành một dãy 05 nồng độ là 128 μg/ml, 32 μg/ml, 8μg/ml, 2μg/ml, 0,5μg/ml

- Chuẩn bị dung dịch vi khuẩn hoặc nấm với nồng độ 5.105CFU/ml lúc tiến hành thử.

- Chuẩn bị mẫu đối chứng: mẫu đối chứng (+) chống sinch được pha trong nước đậy theo nồng độ 10mg/ml với khử trùng bằng màng lọc Millipore 0,22μm; tiến hành các bước thì nghiệm tiếp theo tương tự như các chất thử khác. Mẫu đối chứng (-) chất thử được thế thế bằng nước giấu vô trùng.

- Sau 24h hiểu giá bán trị MIC bằng mắt thường. Giá trị MIC được xác định tại giếng tất cả nồng độ chất thử thấp nhất tạo ức chế hoàn toàn sự phát triển của vi sinh vật.

Xem thêm: Chế Độ Nghỉ Phép Tính Lương Như Thế Nào, Cách Tính Lương Đi Làm Vào Ngày Nghỉ Phép Năm

Thí nghiệm được lặp lại với n = 3.

Phương thơm pháp 2. Thử hoạt tính ức chế vi khuẩn bằng phương pháp khuếch tán đĩa thạch

Phương pháp thử hoạt tính ức chế vi khuẩn là phương pháp của Hadacek et al. (2000). Chủng vi khuẩn sau khi được hoạt hóa từ ống chủng gốc trên môi trường LB đặc, một khuẩn lạc được cấy chuyển sang trọng 5 ml môi trường LB lỏng cùng lắc qua đêm ở nhiệt độ 37oC . Đĩa thử hoạt tính được chuẩn bị bằng giải pháp cấy trải 200 μL dịch khuẩn, nồng độ tương đương 4-5 × 108 CFU/ml lên bề mặt đĩa petri bao gồm chứa môi trường LB đặc, để khô với đục 5-6 giếng, đường kính khoảng 6 milimet sao để cho mỗi giếng biện pháp nhau gần đúng 2-3 centimet. Chuẩn bị dịch chiết thử bằng giải pháp phối hợp cặn chiết methanol của những mẫu thực vật trong Dimethyl Sulfoxide (DMSO) thành những nồng độ theo yêu cầu. Bổ sung 50 μL dịch chiết thử vào những giếng thạch bên trên đĩa petri cùng giữ những đĩa thí nghiệm ở nhiệt độ phòng vào 2 tiếng, tới khi dịch chiết từ những giếng khuếch tán ra môi trường nuôi cấy vi khuẩn; kế tiếp, đặt những đĩa vào tủ ấm 37oC vào 24 giờ. Đối chứng dương là dung dịch chống sinc (Ampicilin 0,1 mg/ml với E. coli với P.. mirabillis; Kanamycin 5 mg/ml với S. aureus với Phường. vulgaris); đối chứng âm là DMSO. Hoạt tính ức chế khuẩn được nhận xét bằng bí quyết đo bán kính (BK) vòng ức chế vi sinh vật bằng công thức: BK (mm) = D-d; trong các số ấy D = đường kính vòng vô khuẩn cùng d = đường kính lỗ khoan thạch. Thí nghiệm được lặp lại cha lần cùng rước giá bán trị bán kính trung bình.

3. Phương thơm pháp Reviews hoạt tính chống oxi hóa

Phương thơm pháp 1. Thông qua làm phản ứng bao vây nơi bắt đầu tự do (DPPH)

Hoạt tính chống lão hóa của mẫu được xác minh trải qua phản nghịch ứng vây hãm cội thoải mái (DPPH). Phản ứng được triển khai theo phương thức của Shela et al. (2003) . Dựa bên trên cách thức 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) có chức năng tạo nên các nơi bắt đầu tự do thoải mái bền vào dung dịch EtOH bão hoà. lúc cho các hóa học thí nghiệm vào tất cả hổn hợp này, giả dụ chất có tác dụng làm trung hoà hoặc vây hãm các nơi bắt đầu thoải mái đang làm cho bớt độ mạnh hấp thụ ánh sáng của các cội tự do thoải mái DPPH. Hoạt tính kháng ôxy hoá được Review trải qua cực hiếm kêt nạp tia nắng của dịch thể nghiệm so với đối hội chứng Khi hiểu trên máy Elisa ngơi nghỉ bước sóng 515 nm.

Các mẫu mã tất cả biểu lộ hoạt tính (SC ≥ 50%) sẽ được thể nghiệm để tra cứu quý giá SC50. Giá trị SC50 được xác minh trải qua nồng độ hóa học thử cùng % hoạt động vui chơi của hóa học test cơ mà làm việc đó 50% các cội thoải mái tạo nên vì chưng DPPH được trung hòa vì chưng hóa học demo.

Phương pháp 2. Dựa vào tích điện khử

Năng lực khử được xác định theo phương pháp của Oyaizu (1986) với một vài hiệu chỉnh nhỏ. Nhiều thể tích sự so sánh của dịch chiết được trộn với đệm phosphate pH = 6,6 để đạt thể tích cuối cùng 1,5ml trước lúc thêm 0,5 ml K3(Fe) 1%. Hỗn hợp được ủ ở 50oC trong đôi mươi phút, sau đó thêm 0,5ml TCA 10% và 2 ml nước che, cuối cùng 0,4ml AlCl3 0,1% được thêm vào. Độ thu phục quang đãng học được xác định tại bước sóng 700nm. Độ hấp thụ quang học càng cao thì năng lực khử càng mạnh. Kết quả được xem toán thù bởi vì cực hiếm IC50, là lượng chủng loại làm cho tăng cường độ hấp thu quang học tập lên 0,50.

Phương pháp 3. Xác định khả năng chống oxi hóa trên mô hình dầu - nước

Hệ nhũ tương dầu - nước được chuẩn bị gồm: 10% dầu Olive, 85% nước và 0,5% Tween 40. Hỗn hợp được đồng hóa ở tốc độ 10.000 rpm trong 5 phút (IKA, T18B, Ultra - Turax, Germany). Chính xác 2ml dịch chiết được trộn đều với 10ml hệ nhũ tương dầu – nước cất trong ống vật liệu nhựa 50 ml có nắp đật, đặt ở bên trong tủ ổn định sức nóng sinh hoạt 50oC, quy trình oxi hoá chất Khủng được quan liêu gần kề hàng ngày. Hàm lượng hydroperoxide được xác định theo phương thức của Richards với Hultin (2002). Hàm lượng hydroperoxide được xác minh trên dịch chiết chất lớn theo phương pháp của Bligh & Dyer (1959). Kết quả tính toán lượng chất hydroperoxide trường đoản cú mặt đường chuẩn Cumene hydroperoxide (HPO) độ đậm đặc tự 0-1đôi mươi nmol/ml.

Nguồn tmê mẩn khảo:

Hồ Việt Đức, (2015), Nghiên cứu nguyên tố hoá học cùng hoạt tính sinch học tập của một số trong những loại thuộc chi Uvatia L. – Họ Na (Annonaceae), Luận án Tiến sĩ Hoá học tập.

Thiard Frank, Tất Tố Trinch, Nguyễn Thuỵ Vy, Nguyễn Hoài Nghĩa, Nguyễn Diệu Liên Hoa, Nguyễn Thị Klặng Phụng, Nguyễn Ngọc Hạnh, Hồ Huỳnh Thuỳ Dương; (2008); Khảo sát hoạt tính khắc chế phát triển của những cây thuốc VN bên trên cái tế bào ung thỏng cổ tử cung HeLa; Tạp chí trở nên tân tiến Khoa học với Công nghệ, tập 11, số 01 – 2008.

Phạm Tkhô cứng Loan, Trần Huy Thái, Phan Văn uống Kiệm, Hoàng Lê Tuấn Anh, Châu Văn Minch, Đỗ Thị Thảo, Trần Thị Sửu, (2013), Hoạt tính sinc học tập của một số trong những vừa lòng chất phân lập từ cây cẩm lai (Dalbergia oliveri Gamble ex Prain); Tạp chí Sinh học tập 2013, 35(4):439-444.

Trần Mỹ Linch, Vũ Hương Giang, Lê Quỳnh Liên, Nguyễn Tường Vân, Ninch Khắc Bản, Châu Văn Minc, (2013), Đánh giá hoạt tính ức chế vi khuẩn chu chỉnh của một số loại thực vật ngập mặn trên vườn nước nhà Xuân Thuỷ, Nam Định, Tạp chí sinh học, 35(3): 342-347.